本规范使用技术所指的硬组织，包括；

（1）以松质骨为主要结构的不脱钙骨组织。

（2）其他含有较软金属支架材料的冠状动脉血管等含金属材料的组织。

不适用于牙齿、皮质骨以及含较大或坚硬金属植体的骨组织，带金属支架的大动脉或大静脉血管，其他坚硬的材料。

2.1　制样设备

2.1.1　切片机：自动轮转式或平推式。

2.1.2　电热鼓风干燥箱：调温范围50℃-200℃。

2.1.3　冰箱：温度范围 -20℃- 4℃。

2.1.4  普通光学生物显微镜。

2.1.5　通风柜。

2.2　制样工具

2.2.1　钨钢刀：40゜

2.2.2　不锈钢尖镊子。

2.2.3　粘附载玻片。

2.2.4　小毛刷。

2.2.5　记号笔。

2.2.6　压片器。

2.2.7　Ⅰ型或圆形样本夹。

2.3　材料

2.3.1　组织固定剂

a）中性福尔马林组织固定液；

b）70%酒精。

2.3.2　组织脱水透明剂

a）酒精，使用浓度：50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 100%；

b）二甲苯；

警告——对人体有害，应在通风柜中使用。

c）丙酮。

警告——对人体有害，应在通风柜中使用。

2.3.3　树脂浸润包埋剂

a）甲基丙烯酸甲酯；

b）邻苯二甲酰二丁酯；

c）过氧化苯甲酰；

d）聚甲基丙烯酸甲酯；

e）N,N,3,5-四甲基苯胺；

f）1-金刚烷硫醇。

警告——以上试剂均对人体有害，应在通风柜中使用。

2.3.4　脱塑剂

a）乙二醇乙醚乙酸酯；

b）乙二醇甲醚乙酸酯。

警告——以上试剂均对人体有害，应在通风柜中使用。

2.3.5　自凝树脂。

警告——对人体有害，应在通风柜中使用。

2.3.6　载玻片规格：25mm×75mm，厚1mm-1.2mm。

2.3.7  盖玻片规格：24mm×24mm，24mm×32mm，厚0.13mm-0.17mm。

3.1　登记编号与组织分切

3.1.1　制作人员验收标本时，应仔细核对组织标本数量、实验编号等信息，并与受理人或送样人核对是否一致并确认。如有不同者，应立即与受理人或送样人联系予以调整修改。

3.1.2　按与送样人确定的分切方向，对组织进行分切，登记编号，将组织放置于脱水盒中，开始脱水。

3.2　组织脱水浸润包埋

3.2.1　根据组织大小及取材部位，选择正确的脱水程序，由低浓度酒精到高浓度酒精顺序，去除组织内水份。

3.2.2　脱水后的组织经二甲苯进行透明，去除组织内的脂质。

3.2.3　经透明后的组织，于甲基丙烯酸甲酯与邻苯二甲酸二丁酯混合液中浸润，使树脂完全浸入组织内部，浸润液按加入聚合催化剂剂量的多少，分为一浸液，二浸液，三浸液，组织在每种浸液中浸润二天。

3.2.4　浸润完毕的组织于玻璃容器中包埋，包埋液为新鲜配制的第三浸液。包埋聚合时间一般为3-5天。

3.3　粘固

3.3.1　将包埋好的树脂块修整至合适大小，并暴露出组织面，且保证组织块上下平行。

3.3.2　将修整好的组织块用自凝树脂粘接于制作好的底座上。

3.4　切片

警告——切片时容易伤手，应做好防护。

3.4.1　开启切片机，将组织固定于样本夹中，于自动轮转式或平推式切片机上，修整出完整的组织面。

3.4.2　切取5微米厚的薄切片，用不锈钢尖头镊夹取切片，再用毛刷将切片于70%酒精溶液中展平。

3.4.3　将切片捞取在玻璃载玻片上，盖上塑料薄膜，放置于压片器中夹紧，于50℃干燥箱中过夜粘固。

3.5　脱塑

3.5.1  次日从干燥箱中取出切片，取下薄膜，放于染色架中。

3.5.2　于乙二醇乙醚乙酸酯或乙二醇甲醚乙酸酯中脱去树脂。

3.6　染色

硬组织切片可以进行石蜡切片所能进行的全部染色，只是染色时间等条件做相应调整。

4.1　组织脱水透明及浸润

组织脱水应充分，二甲苯透明要适度，浸润要完全。

4.2　组织包埋块

组织包埋块应保证组织位置平正，包埋液体要没过组织不少于1cm，聚合时无气泡。

4.3　切片厚度

一般为5微米厚，但为观察荧光素的切片厚度应为10微米。

4.4　结构

切片应完整，厚度均匀，无裂纹，无破损。

4.5　编号

切片、包埋块编号应于标本及送样单一致，并于包埋及切片时再次核对，签字确认。

4.6　染色

按照染色规范要求对硬组织薄切片进行相应染色，并做相应调整。

硬组织制片过程中使用的组织分切机、切片机、钨钢刀、酒精、甲基丙烯酸甲酯等容易伤人或易发生火灾的危险品。应注意制作过程符合安全和环保要求：

a）制片人员分切样本时，应佩戴口罩，及防护手套；

b）制片人员在切片时，应注意切片刀的位置，取放组织块时应锁定切片机，并放下切片刀保护板；

c）制片室应注意通风、防火、配备换气设备和消防器材；

d）组织处理及制片中产生废有机试剂，应装入带盖的瓶中，注明标签，按有关规定统一处理。

2022艾佧科技常规染色技术企业规范、硬组织磨片企业标准规范、骨形态计量与分析企业标准规范，将会陆续推送，敬请期待。