目的 :研究确立骨组织数据的基准参照点,为医学、生物学和人类学等相关研究提供参考。方法 :利用昆明市区10例,汉族、30岁±1岁男性的正常额骨和股骨新鲜解剖学教学标本作为研究材料,制作骨磨片。获取额骨鳞部垂直位、水平位骨磨片和股骨中段水平位骨磨片。在光学显微镜下,观察骨组织的类型和各自的细胞数量(代表骨组织所占百分比例);并测量骨细胞的长径、宽径和厚径。分别直接测量与应用生物力学测量仪测量“额鳞中部”新鲜骨、脱脂脱水骨和煅烧骨的密度与抗压强度。 结果 :额骨鳞部骨组织分为编织骨(62.0%)、板层骨(28.8%)和束状骨(9.2%)3种类型 ;骨细胞亦呈扁椭圆形,但体积大于股骨骨细胞 ;其中编织骨骨细胞椭圆面平行于颅骨表面。股骨中份骨组织分为骨单位(68.5%)、间骨板(27.3%)和环骨板(4.2%)3种类型 ;股骨多数骨细胞长径与骨单位中央管平行。“额鳞中部”新鲜骨、脱脂脱水骨和煅烧骨的密度与抗压强度的相关系数为0.6074。 结论 :获得一特定人群中额骨与股骨的骨细胞的方向和径值、骨组织的类型和占比,确立了骨组织结构数据的一个基准参照点。额鳞中部骨的密度与抗压强度呈线性正相关关系。
关键词 骨组织 ;额骨 ;结构 ;标准数值
目前文献中缺乏人类和动物骨组织的数据库,而组织学数据库建立的关键是确立基准参照点。国 内外学者对骨组织构造的研究多集中在长骨 [1-2],并 且骨细胞的形态结构与功能随年龄增长而不同 [3]。 但是人体额骨鳞部受个体后天活动影响小,能较好 体现遗传特征,可对比性强。因此本课题以人体额 骨为研究主要对象,探索人体骨组织形态的基础数值。
1. 1 材料
采集昆明市区 10 例汉族、30 岁±1 岁男性的正 常额骨和股骨新鲜解剖学教学标本。用空心转头切取 1 cm直径的“ 额鳞中部 ”新鲜骨片 ;用骨锯获取股骨中段骨组织。
1.2 制作骨磨片
采用骨组织磨片系统(德国EXAKT 系统)制作额骨鳞部外板(矢状位和水平位)骨磨片和股骨 中段骨密质的水平位骨磨片。每例标本均获取相应的骨磨片3 片,厚度为25~35 μm。
1.3 测量密度与抗压强度
对于“ 额鳞中部 ”新鲜骨、脱脂脱水骨和煅烧骨的密度与抗压强度,分别为直接测量与应用生物力学测量仪(上海衡翼WDW-100)测量。
1.4 甲苯胺蓝染色
利用 5% 的甲苯胺蓝染色骨磨片30 min。1.5光学显微镜观测骨组织在光学显微镜(Leica)下观测调查骨组织。每 一例标本,额骨鳞部垂直位(垂直于额骨表面)和切面位(平行于额骨弧形表面的切面)骨磨片、股骨中段水平位骨磨片随机各取3 个视野。对于额骨鳞部骨磨片,计数编织骨、板层骨与束状骨骨细胞数量 ;对于股骨中段水平位骨磨片,计数骨单位、 间骨板与环骨板骨细胞数量。利用细胞数代表6 类骨组织所占百分比例。测量额骨鳞部与股骨中段骨 细胞的长径、宽径和厚径。
1.6 统计学处理
利用 SPSS 23.0 进行统计学分析,计量资料以 x ±s 表示,组间比较用t 检验,并回归分析骨的密度与强度相关性。
额骨鳞部骨组织(图 1 A、B,表 1)分为编织骨、 板层骨和束状骨3 种类型。可见额骨鳞部骨细胞亦呈扁椭圆形,但体积大于股骨骨细胞。编织骨占比 为62.0%±6.5% ,骨细胞椭圆面平行于颅骨表面,而其长径相互间不平行,呈编织状。板层骨占比为 28.8%±3.8% ,骨细胞多环绕血管分布,其骨细胞椭圆面长径与血管长轴平行,椭圆面宽径与血管所在圆长轴相切。束状骨占比为9.2%±1.5% ,穿插于编织骨与板层骨之间,其骨细胞的长径与纤维束平行,骨细胞的椭圆面相互间平行,且与颅骨表面接近平行。股骨中份骨组织(图 1 C ,表 1)分为骨单位(占 比 为68.5%±7.0%)、 间骨板(占 比 为 27.3%±3.1%)和环骨板(占比为4.2%±0.5%)3 种类型。对于股骨骨细胞的分布方向,文献 [4] 仅 描述股骨骨细胞与骨单位中央管平行。本研究切片显示,股骨多数骨细胞长径与骨单位中央管平行, 骨细胞宽径与骨单位所在圆相切 ;少数骨细胞长径与骨单位中央管垂直 ;还有一些骨细胞的长轴方向为前2 种的过渡类型。
人体骨组织数值(包括结构、密度和强度3 个 基本指标)的研究参照基准(参照数值)对于医学、 生物学、人类学、国防、体育及人民生产和生活等方面都具有重要意义。获得这些数值及其之间的数量关系,可为不同地区、进化阶段、民族、年龄、 性别、人群、个体的各块骨以及其他动物骨的研究提供参照数值。男性骨骼比较发达,尤其在30 岁左右达到顶峰时期 [5-6] ,且汉族是世界上人口最多的民族 ;故本研究选择30 岁±1 岁的汉族男性作为研究对象最具有代表性。骨单位骨板的胶原纤维有纵行、环行和螺旋行 之分 [3] ;但在本研究中未见纤维方向对骨细胞方向影响 ;可能是因为骨细胞为扁椭圆形,而导致其方向的轻微变化不易在磨片中观察到。教科书 [3] 记载编织骨随着年龄的增长会减少,而本研究观察到额骨有3 种类型的骨组织,其中编织骨所占的比例最多高达62% ;可能与本研究额骨标本的取材部位为额骨鳞部中份有关。有学者统计黄种人额缝出现率高达 10%[7] ,而骨缝处编织骨成份较多 [3] 。额骨鳞部中份骨组织结构的程序性细节丰富,更能体现遗传特征。所以额骨骨组织类型所占比例将是与其他人群比较研究时的一个灵敏指标。另外,本研究结果显示额骨骨细胞明显大于股骨骨细胞,这可能与额骨受外力影响较小有关,更能体现遗传特征 ;所以骨细胞的大小可能是与其他人群比较研究时的又一个灵敏指标。组织学三维重建能够准确测量骨细胞的数值和准确描述其方向。但是三维重建需要对骨组织脱钙并作连续薄切片,而脱钙会使组织变软,切片时组织结构会变形。所以本研究制作骨磨片以显示骨组织的固有形态 ;但是也存在不足,每个磨片的厚度较大,且不易做到厚度均匀一致,因此会影响染色时的着色程度。另外,由于本研究采用的标本例数较少,可能会影响骨密度与强度的相关性分析,并且限制了骨结构与强度相关分析。